Mytilene (griechisch Μυτιλήνη, moderne Aussprache [mitiˈlini], türkisch Midilni) ist die Hauptstadt der Insel Lesbos, der Verwaltungsregion Nördliche Ägäis und Hauptstandort der Universität der Ägäis.
Mytilene zählt heute etwa 32000 Einwohner. Im Hafen der Stadt legt die moderne Schnell-Fähre Richtung Thessaloniki an. Der kleine Flughafen der Stadt ist hauptsächlich für die Tourismusbranche von Bedeutung.
Mytilene ist der Geburtsort von Pittakos, Alkaios, Khair ad-Din Barbarossa und Konstantinos Kenteris.